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96T/192T 1100/2200
O型口蹄疫抗体检测试剂盒
1 抗原预包被板条 1/2块 7 终止液 6ml
2 酶结合物 5/10ml 8 阴性对照 800μl
3 10倍浓缩洗涤液 50ml 9 阳性对照 400/800μl
4 底物A液 6ml 10 封板膜 2/4张
5 底物B液 6ml 11 说明书 1份
6 样本释液 50ml 12
O型口蹄疫抗体检测试剂盒用于检测猪、牛、羊血清中的口蹄疫病毒抗体,用于评估口蹄疫苗免疫状况。
需自备的设备及试剂
1.微量移液器:10μl-100μl、100μl-1000μl。
2.一次性移液器吸头。
3.量筒:500ml。
4 96孔板酶标仪。
5.蒸馏水或去离子水。
6.洗瓶或洗板机。
样品制备
取动物全血,按常规方法制备血清,要求血清清亮,无溶血。
洗涤液的准备
浓缩洗涤液使用前应恢复至室温,如有盐结晶,摇动使结晶的盐溶解,然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右。
注意事项
1.试剂盒使用前各试剂应平衡至室温,使用前应摇匀,使用后放回2-8℃。
2.不同品种、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用,使用试剂时应防止试剂污染。
3.底物和终止液对皮肤和眼可能有刺激性,使用时应该注意防护。
4.TMB(底物B液)不要暴露于强光和避免接触氧化剂。
5.检测板拆封后应避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中,并尽快置于2-8℃)。
6.所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。
7.严格遵守操作说明可以获得*的结果。操作过程中移液、定时和洗涤等的全部过程必须准确。
8.抗原包被板为一次性用品,不得重复使用;
操作步骤
1.每次试验均设置空白孔1孔、阳性对照1孔、阴性对照2孔;
2.将样品稀释液按50ul/孔加入到微孔反应板内,之后将待检样品血清、阴性对照、阳性对照按50ul/孔加入孔内并吹打混匀(移液器枪头请勿混用);
3.盖上封板膜(可按实际需要自行裁剪),置37℃温育60分钟。
4.小心揭开封板膜,甩掉板孔中的溶液,使用工作浓度洗涤液每孔加250ul,加满液体后停留1分钟,后甩去孔内液体,以上步骤重复3次,*在干净吸水纸上拍干。
5.每孔加酶结合物50μl,盖上封板膜,置37℃温育60分钟。
6.小心揭开封板膜,甩掉板孔中的溶液,洗涤3次, 方法同4。切记*在干净吸水纸上拍干。
7.每孔先加底物A液50μl、再加底物B液50μl,混匀、盖上封板膜37℃闭光显色15分钟。
8.每孔加终止液50μl,使反应终止,10分钟内测定结果。
结果判定
以空白对照调零用酶标仪于450nm(630nm作参比波长)读取吸光度A值。
试验成立的条件是:
N值>0.8、P值<0.4;
计算方法:
PI (阻断率)= 1 —(样品OD值 ÷ 阴性OD均值)
阴阳性判断:
牛、羊样本
PI(阻断率)>45%则判断为阳性;
PI≤45%则判断为阴性。
猪样本
PI(阻断率)>35%则判断为阳性;
PI≤35%则判断为阴性。
有效期
贮存方法: 2 - 8oC下贮存。
有效期: 12个月。
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