猪口蹄疫病毒3ABC蛋白试剂盒使用步骤

猪口蹄疫病毒3ABC蛋白抗体检测试剂盒

用于检测猪血清中的猪口蹄疫病毒3ABC非结构蛋白抗体，用于区别临床野毒感染猪和用灭活疫苗免疫的猪。

需自备的设备及试剂

微量移液器： 0.5μl～10μl、10μl～100μl、100μl～1000μl。 一次性移液器吸头。 量筒：500ml。 96孔板酶标仪。 蒸馏水或去离子水。 洗瓶或洗板机。

样品制备

取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。

注意事项

试剂盒使用前各试剂应平衡至室温，使用前应摇匀，使用后放回2～8℃。 不同品种、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用，使用试剂时应防止试剂污染。 底物和终止液对皮肤和眼可能有刺激性，使用时应该注意防护。 TMB（底物B液）不要暴露于强光和避免接触氧化剂。 检测板拆封后应避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中，并尽快置于2～8℃)。 所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。 严格遵守操作说明可以获得*的结果。操作过程中移液、定时和洗涤等的全部过程必须精确。 血清稀释板为一次性用品，不得重复使用；血清稀释板的*容量为300μl/孔。

操作步骤

取预包被的检测板（根据样品*，可拆开分次使用），将稀释好的待检血清取100μl加入到检测板孔中。同时设阴性、阳性及空白对照各1孔，取阴性及阳性对照各100μl

分别加入反应孔中，空白对照仅加入100μl样本稀释液。轻轻振匀孔中样品（勿溢出），

盖上封板膜，置37℃温育30分钟。 小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，用洗涤液洗3次。每次用洗涤液注满板孔（约350μl），静置1分钟后甩掉。洗涤3次后在干净吸水纸上拍干。 每孔加酶结合物100μl，盖上封板膜，置37℃温育30分钟。 小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，洗涤3次, 方法同2。切记*在干净吸水纸上拍干。 每孔先加底物A液50μl、再加底物B液50μl，混匀、盖上封板膜37℃闭光显色10分钟。 每孔加终止液50μl，使反应终止，10分钟内测定结果。

结果判定

以空白对照调零用酶标仪于450nm（630nm作参比波长）读取吸光度A值。试验成立的条件是阳性对照孔A450值大于或等于0.4，阴性对照孔A450值必须小于0.1。如果试验无效，试验中的操作值得怀疑，试验应重做，并仔细检察各组分。

样品A450值大于0.15+阴性对照孔均值，判为阳性；样品A450值小于0.15+阴性对照孔均值，判为阴性；如阴性对照孔均值小于0.05按0.05计算。

有效期

贮存方法： 2 - 8oC下贮存。

有效期： 12个月。