猪流行性腹泻抗原安全检测试剂盒

猪流行性腹泻抗体检测试剂盒

1 抗原预包被板条 1/2块 7 阴性对照 0.8/1.6ml

2 酶结合物 11/22ml 8 阳性对照 0.8/1.6ml

3 10倍浓缩洗涤液 50/100ml 9 血清稀释板 1/2块

4 显色液 11/22ml 10 封板膜 2/4张

5 样本稀释液 50/100ml 11 说明书 1份

6 终止液 11ml      

猪流行性腹泻（Porcine Epidemic Diarrhea, PED）病毒抗体检测试剂盒用于检测猪血清中的猪流行性腹泻病毒抗体

需自备的设备及试剂

1.    微量移液器： 0.5μl-10μl、10μl-100μl、100μl-1000μl。

2.    一次性移液器吸头。

3.    量筒：500ml。

4.    96孔板酶标仪。

5.    蒸馏水或去离子水。

6.    洗瓶或洗板机。

样品制备

取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。

洗涤液的准备

浓缩洗涤液使用前应恢复至室温，如有盐结晶，摇动使结晶的盐溶解，然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右。

样品的稀释

在血清稀释板中按1：99的体积比稀释待检血清（例如：495μl样品稀释液中加5μl待检血清）。

注意：阴性和阳性对照不用稀释。取每个样品后都要更换吸头，准确记录每个样品在板上的位置。每个样品在加入到包被板微孔前应充分混匀。

注意事项

1.    试剂盒使用前各试剂应平衡至室温，使用前应摇匀，使用后放回2-8℃。

2.    不同品种、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用，使用试剂时应防止试剂污染。

3.    底物和终止液对皮肤和眼可能有刺激性，使用时应该注意防护。

4.    TMB（底物B液）不要暴露于强光和避免接触氧化剂。

5.    检测板拆封后应避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中，并尽快置于2-8℃)。

6.    所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。

7.    严格遵守操作说明可以获得*的结果。操作过程中移液、定时和洗涤等的全部过程必须精确。

8.         血清稀释板为一次性用品，不得重复使用；血清稀释板的*容量为300μl/孔。

操作步骤

1.    取预包被的检测板（根据样品多少，可拆开分次使用），将稀释好的待检血清取100μl加入到检测板孔中。同时设阴性对照1孔、阳性及对照2孔，取阴性及阳性对照各100μl

分别加入反应孔中。轻轻振匀孔中样品（勿溢出）。

2.    盖上封板膜（可按实际需要自行裁剪），置37℃温育30分钟。

3.    小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，使用工作浓度洗涤液每孔加250ul，后甩去孔内液体，以上步骤重复4-6次，*在干净吸水纸上拍干。

4.    每孔加酶结合物50μl，盖上封板膜，置37℃温育30分钟。

5.    小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，洗涤4-6次, 方法同3。切记*在干净吸水纸上拍干。

6.    每孔加显色液100μl，混匀、盖上封板膜37℃闭光显色10分钟。

7.    每孔加终止液50μl，使反应终止，10分钟内测定结果。

结果判定

用酶标仪于450nm（630nm作参比波长）读取吸光度OD值。

试验成立的条件是：

阴性对照（N）OD值<0.15，同时阳性对照（P）OD值>0.4。

计算方法：

样品OD值÷阳性对照OD均值=S/P值

阴阳性判断：

S/P值≥0.35判断为阳性；

S/P值<0.35判断为阴性。