布病虎红平板凝集抗原的使用方法及注意事项

虎红平板凝集试验（RBT，Rose Bengal Test）是国际贸易中牛、羊、猪布鲁氏菌病检测的标准试验，在我国也用于人布鲁氏菌病监测的初筛。抗原是经培养灭活后，离心收集菌体用虎红染料染色后悬浮于乳酸缓冲液中制成。由于所用的抗原是酸性（ PH3.6-3.9 ）带色的抗原，该抗原与被检血清作用时能抑制血清中的IgM类抗体的凝集活性、检查的抗体是IgG类，因此提高了反应的特异性。该方法灵敏度高，操作方便，检测快速且价格便宜，适于动物群体布鲁氏菌病的普查。

布鲁氏菌虎红平板凝集试验具体操作方法如下:

一、材料准备

1、布鲁氏菌虎红平板凝集试验抗原、布鲁氏菌标准阳性血清、布鲁氏菌阴性血清。

2、受检血清应新鲜,无明显蛋白凝块,无溶血。

3、洁净的玻片或玻璃板。在其上划分成4cm2的方格。

4、微量移液器及无菌吸头。

5、干净牙签或火柴杆。

二、操作方法

1、在玻璃板各方格标记受检血清编号,然后加入相应的血清25μL（动物布鲁氏菌病诊断技术GB/ 18646-2018）。

2、在各待检血清旁滴加虎红抗原25μL。

3、用灭菌牙签类小棒快速混匀血清和抗原，涂成2cm直径的圆形，于4分钟内观察结果。

三、结果判定

在标准阴性血清不出现凝集、标准阳性血清出现凝集时，试验成立，方可对受检血清进行判定。凡出现肉眼可见凝集现象者（“+"以上反应）判为阳性。

虎红平板凝集试验判定标准：

“—"无凝集,呈均匀粉红色

“+"稍能查到凝集,稍有卷边形成,凝集物间液体呈红色。

“++"形成较明显卷边,凝集块间液体稍清亮。

“+++"凝集反应较强,液体较清亮。

“++++"凝集块呈菌丛状,凝块间液体明显清亮。

四、注意事项

布鲁氏菌虎红平板凝集试验抗原储藏温度:2-8℃，使用前需充分摇匀，务必恢复至室温或18度以上后再检测。

试验应设标准阴、阳性血清对照。