牛病毒腹泻抗体检测卡由预包被牛病毒性腹泻抗原的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成,应用酶联免疫法(ELISA)原理检测牛血清、血浆样本中牛病毒性腹泻抗体。实验时在酶标板中加入对照血清和待检样本,经温育后若样品中含有病毒性腹泻抗体,则将与酶标板上抗原结合,经洗涤除去未结合的其他成分后;再加入酶标记物,与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合;再经洗涤除去未结合的酶标记物,在孔中加TMB底物液,与酶标结合物反应形成蓝色产物,显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关;加入终止液终止反应后,产物变为黄色;用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值,即可知样品是否含有牛病毒性腹泻抗体。
牛病毒腹泻抗体检测卡用法与判定:
1.1样本处理
1.1.1 血清:在室温下血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,如保存过程中有沉淀,请再次离心。
1.1.2 血浆:应根据标本的要求选择EDTA,柠檬酸钠或者肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,再离心20分钟(2000-3000转/分),仔细收集上清,如保存过程中有沉淀,请再次离心。
1.2 操作步骤 将密封的检测卡从铝箔袋中取出,置于干燥平整的桌面上,用吸管吸取适量血清或血浆,缓慢滴加1滴到加样孔中(约40μL),再滴入2~3滴样本处理液(约80μL~120μL),并开始计时。加样完成后10~15分钟观察结果。